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      柠檬酸的发酵因、工艺、原料而异，但在发酵过程中还需要掌握一定的温度、通风量及ph值等条件。一般认为，黑曲霉适合在28～30℃时产酸。温度过高会导致菌体大量繁殖，糖被大量消耗以致产酸降低，同时还生成较多的草酸和---酸；温度过低则发酵时间延长。微生物生成柠檬酸要求低ph，适ph为2～4，这不仅有利于生成柠檬酸，减少草酸等杂酸的形成，同时可避免杂菌的污染。

      柠檬酸发酵要求较强的通风条件，有利于在发酵液中维持一定的溶解氧量。通风和搅拌是增加培养基内溶解氧的主要方法。随着菌体生成，发酵液中的溶解氧会逐渐降低，从而抑制了柠檬酸的合成。采用增加空气流速及搅拌速度的方法，使培养液中溶解氧达到60%饱和度对产酸有利。柠檬酸生成和菌体形态有密切关系，若发酵后期形成正常的菌球体，有利于降低发酵液粘度而增加溶解氧，因而产酸就高；若出现异状菌丝体，而且菌体大量繁殖，造成溶解氧降低，使产酸迅速下降。发酵液中金属离子的含量对柠檬酸的合成有非常重要的作用，过量的金属离子引起产酸率的降低，由于铁离子能---乌头酸水合酶的活性，从而影响柠檬酸的积累。

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仪器设备：

试样制备：滴定液（0.1mol/l）

配制：取无水冰---（按含水量计算，每1水加---5.22ml)750ml，加入（70%-72%）8.5ml，柠檬酸专卖，摇匀，在室温下缓缓滴加---23ml，柠檬酸生产厂家，边加边摇，加完后再振摇均匀，放冷，加无水冰---适量使成1000ml，摇匀，放置24小时。若所测供试品易---化，则须用水份测定法测定本页的含水量，再用水和---调节至本液的含水量为0.01%-0.2%。